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产品基本信息
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产品名称 |
Applied CellTM 人间质干细胞诱导成脂分化试剂盒 |
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货 号 |
AC-1001029 |
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规 格 |
1kit |
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保存条件 |
基础培养基2-8℃，添加剂-20--80℃保存； 混合后2-8℃保存，2-3周内使用完毕 |
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使用范围 |
人间质干细胞诱导分化成脂 |
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保质期 |
1年 |
产品简介
人间质干细胞成脂诱导分化试剂盒是埃泽思生物（Applied CellTM）研发的一款用于人间质干细胞诱导分化成脂的试剂盒，可用于骨髓、脐带、脂肪等组织来源的间充质干细胞的诱导成脂分化。本产品于科学研究，不能用于临床诊断、治疗，以及其他用途。
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试剂 |
规格 |
数量 |
运输 |
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人间充质干细胞脂肪维持基础培养基
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87mL |
1瓶 |
冰袋 |
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人间充质干细胞脂肪维持培养添加剂I
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11mL |
1瓶 |
干冰 |
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人间充质干细胞脂肪维持培养添加剂II
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2mL |
1管 |
干冰 |
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以人间质干细胞脂肪维持培养基为基础，再配制人间质干细胞诱导成脂分化培养基
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人间质干细胞诱导成脂分化添加剂
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2mL |
1管 |
干冰 |
产品内容
产品特性
l 诱导分化程序简单便捷。
l 诱导成脂细胞效率高。
操作方法
1. 相关材料
• Xeno-Free人间充质干细胞培养基（Applied Cell™:AC-1001003）
• 人间充质干细胞诱导成脂分化试剂盒（Applied Cell™:AC-1001029）
• 成脂检测染液（Applied Cell™:AC-1001022）
• 细胞固定液
• Xeno-Free细胞消化液（Applied Cell™:AC-1001024/1001025）
•磷酸盐缓冲液(1×PBS) （Applied CellTM: Cat.AC-1001037）
2.实验准备
由于人间质干细胞诱导成脂分化试剂盒中各组分的复杂性，此试剂盒分为诱导成脂分化培养基和脂肪维持培养基，实验人员拿到试剂盒后，需要先配制人类间充质干细胞脂肪维持培养基，再以脂肪维持培养基为基础，配制诱导成脂分化培养基，具体配制方法如下：
2.1人间质干细胞脂肪维持培养基的配制
2.1.1 在2-8℃解冻人间质干细胞脂肪维持培养添加剂I、II，轻晃摇匀；
2.1.2 随后将添加剂依次加入到人间质干细胞脂肪维持基础培养基中（2种添加剂共13mL与87mL基础培养基彻底混合）混匀，即为人间质干细胞脂肪维持培养基。人间质干细胞脂肪维持培养基可在2-8℃稳定储存2-3周。
注意：人间质干细胞脂肪维持添加剂只能在2-8℃解冻，待添加剂加入到培养基以后，请用培养基润洗添加剂试管1-2次，因添加剂量较少可防止添加剂粘附在试管壁上造成损失。
2.2人间质干细胞诱导成脂分化培养基的配制
2.2.1 在2-8℃解冻人间质干细胞诱导成脂分化添加剂，轻晃摇匀；
2.2.2 取配制好的人间质干细胞脂肪维持培养基48mL，加入2mL解冻的人间质干细胞诱导成脂分化添加剂，轻摇混匀即为人间质干细胞诱导成脂分化培养基。人间质干细胞诱导成脂分化培养基可在2-8℃稳定储存2-3周。
注意：人间质干细胞诱导成脂分化添加剂只能在2-8℃解冻，待添加剂加入到培养基以后，请用培养基润洗添加剂试管1-2次，因添加剂量较少可防止添加剂粘附在试管壁上造成损失。
3. 实验操作
3.1诱导成脂（以6孔板为例）
3.1.1 将传代或复苏冻存的人间质干细胞接种到6孔板上，密度为2×104 -3×104 cells/cm2或2×104 -3×104 cells/孔，置于37℃，5% CO2培养箱中培养；
3.1.2 当人间质干细胞融合度达到80-90%时，开始诱导脂肪前体细胞分化。吸掉 Xeno-Free人间充质干细胞培养基，每孔加1ml预热PBS清洗一次，吸掉PBS，加入2 ml人间质干细胞诱导成脂分化培养基，以此记为第0天；
注意：人间充质干细胞诱导成脂分化培养基使用前需预热至37℃。
3.1.3 每1-2天更换人间充质干细胞诱导成脂分化培养基；
3.1.4第7天开始更换，加入人间质干细胞脂肪维持培养基，每1-2天更换一次。
注意：1.培养基每1-2天换液。由于随着脂肪细胞的成熟，pH的降低会观察到培养基变黄。pH从7降到6.5，细胞增殖会变慢。pH在6.5到6时，细胞活力会降低。当培养基从红色 (pH 7)变成黄色(pH≤6)时，需要马上换液。
2.换液时一定不能使培养基变干，培养基变干会降低细胞层对培养皿表面的粘附。
3.细胞分化效果和供体有关。供体的年龄是一个因素。有研究发现与年长者相比，年轻供体来源的细胞的分化能力更强。
3.2 成脂检测染液染色
3.2.1、 每6ml成脂染液加入4ml蒸馏水制成染色工作液，混匀室温放置5-10分钟
3.2.2、脂肪诱导分化结束后，吸走6孔板中的培养基，用1×PBS冲洗1-2次。每孔加入2 mL 细胞固定液， 固定10 min。
3.2.3、吸走细胞固定液，用1×PBS冲洗2次。，每孔中加入1 mL成脂检测染色工作液室温染色15min。
3.2.4、吸走成脂检测染液，用1×PBS冲洗2-3次。
3.2.5、将培养板置于显微镜下观察成脂染色效果，拍照。
注意：染色后显微镜观察，及时照相。如果时间过长，脂肪滴会自发破裂。