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Xeno-Free人间充质干细胞培养基
产品基本信息
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产品名称
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Applied Cell ® Xeno-Free人间充质干细胞培养基
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货 号
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AC-1001003
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规 格
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基础培养基450mL，添加剂50mL
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运输保存条件
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基础培养基2-8℃，添加剂-20℃至-80℃；混合后2-8℃
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使用范围
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人类骨髓、脂肪、脐带等组织来源的间充质干细胞
原代分离、扩增与传代培养
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保质期
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12个月
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产品简介
Xeno-Free人间充质干细胞培养基是埃泽思生物（Applied Cell®）的一款无外源动物成分的人间充质干细胞培养基。可应用于人骨髓、脂肪、脐带等组织来源的间充质干细胞的原代分离、扩增与传代培养，并保持其多向分化潜能。本产品内毒素水平远低于中国药典标准，生产过程遵循ISO9001体系,并符合GMP指导原则。
Xeno-Free人间充质干细胞培养基主要成分：氨基酸，维生素、无机盐、白蛋白，转铁蛋白、胰岛素、微量元素，细胞因子等。
产品特性
l 无外源动物蛋白成分，大大降低各类病毒、霉菌和支原体等的污染风险。
l 全程无血清生产，极大降低批次间差异。
l 可用于原代分离，且培养过程无需包被培养板。
l 扩增效率高，24h左右增殖翻倍，节省培养时间。
l 内毒素<0.06EU/ml，远低于中国药典水平
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组分
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规格
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数量
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运输
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Human Mesenchymal Stem Cell Basal Medium
人间充质干细胞基础培养基
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450mL
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1瓶
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冰袋
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Human Mesenchymal Stem Cell Supplement
人间充质干细胞添加剂
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50mL
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1瓶
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干冰
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产品内容
相关产品
Serum-Free细胞冻存液（Applied Cell®: Cat. no.AC-1001006）
人脐带间充质干细胞（Applied Cell®: Cat. no.AC-2001003）
人脂肪间充质干细胞（Applied Cell®: Cat. no.AC-2001004）
Xeno-Free细胞消化液（Applied Cell®: Cat. no. AC-1001024/1001025 ）
实验准备
人间充质干细胞培养基配制
1.1 37℃快速解冻人间充质干细胞添加剂，快速溶解时不易破坏添加剂中营养物质，时间大致为10min。待添加剂融化后摇匀，分装或直接按比例添加到基础培养基中，分装后添加剂立即储存于-20℃至-80℃，避免反复冻融 。
1.2将添加剂以10%比例加入到人间充质干细胞基础培养基中，混匀，即为人间充质干细胞培养基（AC-1001003）。混合后培养基可在2-8℃ 稳定储存2-3周，不建议使用已配制超过3周的培养基。
1.3人间充质干细胞培养基可直接应用于人类骨髓、脂肪、脐带等组织来源的间充质干细胞的原代分离、扩增与传代培养。
操作方法(以下步骤皆应在无菌条件下操作)
hMSC细胞复苏(10cm dish)
2.1 从液氮中取出冻存的hMSC细胞，迅速将冻存管放入37℃水浴快速融解。
2.2 在生物安全柜或超净台中，将解冻后的细胞悬液缓慢加入5 mL预温的人间充质干细胞培养基（AC-1001003）。
2.3 1000rpm 离心3 min，吸掉上清，加入10ml人间充质干细胞培养基重悬细胞。
2.4 将细胞均匀铺到培养皿中，水平十字振动培养皿使细胞均匀分布，5% CO2的37℃恒温细胞培养箱中培养24小时后观察细胞状态。
2.5 24h后更换新鲜人间充质干细胞培养基继续培养，每2-3天更换培养液。
hMSC细胞传代培养
1. 在显微镜下观察细胞，当细胞融合度达到90%，即可传代。
2. 在超净台/安全柜中，吸掉原有培养基，加入PBS溶液清洗一次，加入Xeno-Free细胞消化液（AC-1001024/1001025）使之完全覆盖皿/瓶底。
3. 室温孵育4-5分钟或37℃孵育2-4分钟，显微镜下观察大部分细胞脱离皿底即停止消化。
4. 加入消化液2倍体积的人间充质干细胞培养基，用移液器轻轻吹打瓶壁上未完全脱离的细胞，并轻轻吹打混匀，使细胞完全分散。
5. 将细胞悬液转移到15 mL离心管中，1000 rpm离心3 min。
6. 弃上清，加入人间充质干细胞培养基，重悬细胞，计数。1：3-1：4比例传代，或按1-2x104 cells/cm2 传代，均匀铺在培养皿/瓶中，置于37℃，5%CO2 培养箱中培养。
注意：细胞传代所需的时间：2-4天。5代及之前的细胞，生长速度较快。5代以后的细胞，生长速度稍缓。
hMSC细胞冻存
1. 细胞达到90%汇合度， 吸掉原有培养基，PBS清洗一次。
2. 加入Xeno-Free细胞消化液（AC-1001024/1001025）使之完全覆盖皿/瓶底，室温孵育4-5min或37℃孵育2-4min分钟，显微镜下观察大部分细胞脱离皿底即停止消化。
3. 加入消化液2倍体积的人间充质干细胞培养基，用移液枪轻轻吹打瓶壁上未完全脱离的细胞，并轻轻吹打混匀，使细胞完全分散。
4. 将细胞悬液转移到15 mL离心管中，1000 rpm离心3 min，吸掉上清。
5. 加入适量Serum-Free细胞冻存液（AC-1001006），调整细胞冻存密度在1×106 cells/mL左右，每支冻存管分装1.5-2ml。
6. 直接放入-80℃，24h后转入液氮中长期保存。
细胞形态图
间充质干细胞形态图
脂肪生成 成骨生成 软骨生成
质量控制
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检验项目
Test Catagories
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参考数据
Reference Data
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结果
The results
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外观
Physical APPearance
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橙红色液体
Orange-red liquid
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符合规定
Conform to the provisions
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澄清度
Clarity
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澄清
Clear
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符合规定
Conform to the provisions
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pH值
Ph value
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6.9-7.3
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符合规定
Conform to the provisions
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渗透压
Osmolality
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270-340
（mosm/KgH2O）
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符合规定
Conform to the provisions
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细菌内毒素
Endotoxin
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小于0.06 EU/ml
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符合规定
Conform to the provisions
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无菌
Sterility
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无菌
Sterility
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符合规定
Conform to the provisions
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支原体
Mycoplasma
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0.11um过滤，支原体试验为阴性
The mycoplasma test was negative after 0.11um filtration
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符合规定
Conform to the provisions
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细胞生长试验
Cell growth test
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细胞为梭形，呈指纹状或螺旋状生长
The cells are spindle - shaped, fingerlike or spiral
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符合规定
Conform to the provisions
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